"Д Н К - С И Н Т Е З"


Главная страница

Олигонуклеотиды

Модифицированные олигонуклеотиды

Зонды для ПЦР в "реальном времени"

Модифицированные нуклеозидтрифосфаты

Немодифицированные нуклеозидтрифосфаты

ПЦР в "реальном времени"

Рекомбинантные белки

Клонирование и мутагенез

Справочная информация

Цены

Контакты

Справочная информация

SYBR Green I: визуализация ДНК при электрофорезах

SYBR Green I является одним из наиболее чувствительных красителей, применяемых для детекции двуцепочечных молекул ДНК при электрофорезах в агарозных и полиакриламидных гелях. Чувствительность этого красителя приблизительно в 25 раз выше, по сравнению с наиболее распространенным до настоящего времени бромистым этидием (EtBr). При использовании трансиллюминатора с длиной волны 300 нм, с помощью SYBR Green I может быть детектировано 60 пг двуцепочечной ДНК. Кроме этого, SYBR Green I с успехом может применяться при окрашивании синтетических олигонуклеотидов в полиакриамидных гелях, при этом его чувствительность выше, чем у EtBr в 50-100 раз. Олигонуклеотид длиной 24 основания, может быть детектирован в количестве 1-2 нг.
Высокая чувствительность SYBR Green I объясняется уникальными характеристиками этого красителя - высокой аффинностью к ДНК, и сильному - более чем в 10 раз, по сравнению с EtBr - увеличению флуорисценции при связывании с ДНК. При этом, квантовый выход комплекса ДНК-SYBR Green I (около 0,8) более чем в 5 раз выше, чем в случае комплекса ДНК-EtBr (около 0,15). Максимум поглощения SYBR Green I наблюдается при 497 нм. Максимум эмиссии флуорисценции красителя связанного с ДНК - 520 нм. Кроме главного, в спектре красителя имеются два небольших дополнительных максимума поглощения - при 290 нм и 380 нм. Такие спектральные характеристики позволяют детектировать краситель различными приборами - от ультафиолетовых трансиллюминаторов и ламп до лазеров с длиной волны в районе 500 нм (синий свет).

Использование SYBR Green I.

Окрашивание образца ДНК перед электрофорезом.

Благодаря высокому сродству SYBR Green I к ДНК, можно окрашивать образцы ДНК перед электрофорезом. Окрашивать ДНК можно в буфере для нанесения (pH 7,5-8,0), при этом в конечном растворе концентрация красителя может быть от 1Х до 10Х (исходный раствор - 10,000-кратный). Для повышения эффективности окрашивания, рекомендуется выдержать образцы в течение 5-15 минут перед нанесением на гель.

Окрашивание ДНК в течение электрофореза.

Для этого краситель SYBR Green I добавляют в агарозные или акриламиндые гели непосредствено перед их заливкой. Конечная концентрация красителя в геле - 1Х.

Окрашивание ДНК после электрофореза.

Необходимо приготовить достаточное количество окрашивающего раствора. Концентрация красителя в конечном растворе должна быть 1Х для ДНК и 2Х для РНК. Окрашивающий раствор должен быть приготовлен на основе ТАЕ, TBE или TE (pH 7,5-8,0). Окрашивают гели при легком перемешивании при комнатной температуре в течение 10-30 минут. Окрашивание желательно проводить в условиях, при которых доступ света к окрашивающему раствору был бы минимальным.

Хранение и безопасность. Раствор SYBR Green I в ДМСО следует хранить при температуре –20°C в защищенном от света месте. Срок хранения красителя в этих условиях - не менее 1 года.
Несмотря на то, что мутагенная активность SYBR Green I значительно ниже, чем бромистого этидия [Singer et al., Mutat. Res. 439: 37-47 (1999)], работать с красителем необходимо в перчатках с соблюдением всех строгих правил работы с опасными мутагенными веществами.

~ главная страница ~ олигонуклеотиды ~ зонды для ПЦР в "реальном времени" ~ модифицированные нуклеозидтрифосфаты ~немодифицированные нуклеозидтрифосфаты ~
~ ПЦР в "реальном времени" ~ секвенирование ~ клонирование ~ мутагенез ~